P-TEFb活性复合物组装的细胞定位研究

【摘要】P-TEFb复合体是调控真核基因转录延伸的重要转录因子。P-TEFb以两种形式存在于细胞内,第一种形式是与7SK和HEXIM1形成无活性7SKsnRNP复合体；另一种形式是有转录活性的复合体。P-TEFb与BRD4结合,形成BRD4-PTEFb是最早发现的活性复合物。最近研究发现P-TEFb也与ELL2和AFF4形成新型活性复合物,也就是超级延伸复合物(简称SECs),这类复合物还包含ENL、AF9、AFF1等因子[1-4]。鉴于P-TEFb和SECs在转录延伸过程中的重要作用,本实验室前期已对P-TEFb无活性复合体(7SKsnRNP)与活性复合体(BRD4/P-TEFb,SECs)如何相互转化以及P-TEFb如何被募集到染色体上进行了相关研究,并且发现他们被调控的信号通路及其分子机制。然而,对于P-TEFb、BRD4、ELL2及AFF4等因子发生整合的场所却并不清楚。据文献报道,nuclearspeckles是组装、储存、修饰剪接因子的空间[5]。因此,我们推测,nuclearspeckles是否也是P-TEFb活性复合物发生整合的场所?本文主要围绕P-TEFb、BRD4和SECs是否是在nuclearspeckles中发生整合以及它们整合的分子机制等科学问题进行初步探究。本研究以稳定表达Flag-CDK9的F1C2和HeLa细胞株为实验模型,通过基因体内过表达、基因沉默及免疫荧光等实验技术和方法,发现了两种与转录延伸过程密切相关的复合物(BRD4/P-TEFb和SECs)中的BRD4、CyclinT1、CDK9及AFF4都能定位于speckles。在应激条件下,这些因子会不同程度的在speckles中聚集。对这些因子定位于speckles的分子机制探索的过程中发现,CDK9通过与BRD4的PID结构域结合,从而将BRD4募集到speckles中。同时研究发现BRD4、CyclinT1、AFF4、ENL的沉默不影响CDK9定位于speckles。而CyclinTl则是通过其501-530区域与ELL2结合,被ELL2募集到speckles中。最后我们发现CDK9、ELL2不是AFF4定位于speckles的关键因子。本文发现了P-TEFb活性复合物被募集整合的场所,并且对其整合的机制进行了初步的探究,为进一步揭示和完善P-TEFb活性调控的分子模式和基因转录的分子机制有重要意义。
【作者】周超；
【导师】陈瑞川；
【作者基本信息】厦门大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】P-TEFb；SECs；Nuclearspeckles；

【参考文献】
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